一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：

1. 準備RPMI-1640培養(yǎng)基，90%；優(yōu)質胎牛血清，10%。
2. 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3. 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲存。
   • 細胞處理：
4. 復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
5. 細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
6.  

1.      將培養(yǎng)瓶中細胞輕輕吹打后吸出，移入15ml離心管中，在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液。

2.      根據細胞的生長狀態(tài)，按1:2或以上比例用新鮮培養(yǎng)基重懸細胞，將合適量培養(yǎng)液移入到T-25培養(yǎng)瓶中或T-75培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

3）細胞凍存：待細胞生長狀態(tài)良好時，可進行細胞凍存。懸浮細胞直接計數(shù)后離心，用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中。本公司按每個凍存管細胞數(shù)目大于1X10⁶個細胞凍存。