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小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞適用于各種組織的原代培養(yǎng)

更新時間:2020-04-22點(diǎn)擊次數(shù):2131
  小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞是從供體中取得組織或細(xì)胞后在體外進(jìn)行的培養(yǎng),原代培養(yǎng)不僅是建立各種細(xì)胞系的開始,也是從事組織或細(xì)胞培養(yǎng)工作人員應(yīng)熟悉和掌握的基本的技術(shù)。
  原代培養(yǎng)的組織或者細(xì)胞的生物學(xué)特性沒有發(fā)生很大變化,仍具有二倍體遺傳物質(zhì),接近和反映體內(nèi)生長特性,很適合作藥物測試、基因表達(dá)測試、細(xì)胞分化等實(shí)驗(yàn)研究。原代培養(yǎng)是獲取細(xì)胞的主要手段,但原代培養(yǎng)的組織由多種成分組成,比較復(fù)雜,即使同一類型細(xì)胞如成纖維樣細(xì)胞或上皮樣細(xì)胞,細(xì)胞間也存在很大差異。如果供體不同,即使組織類型、部位相同,個體差別也可以在細(xì)胞上反映出來。
  因而原代細(xì)胞的部分生物學(xué)特征尚不穩(wěn)定,如要做較為嚴(yán)格的對比性實(shí)驗(yàn)研究,還需要對原代培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行短期傳代后再進(jìn)行(需要注意的是有些細(xì)胞在傳代后可能會發(fā)生一些生物學(xué)特性的變化)。一般采用2-5代的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。當(dāng)然特殊情況和一些終端分化細(xì)胞如神經(jīng)細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、心肌細(xì)胞除外。小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞原代培養(yǎng)的方法很多,基本和常用的為組織塊原代培養(yǎng)法和離散細(xì)胞原代培養(yǎng)法(消化法)。
  小鼠主動脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)法是原代細(xì)胞培養(yǎng)常用的基本方法,適用于各種組織的原代培養(yǎng),特別是難以消化的組織,組織塊原代培養(yǎng)法操作程序簡單,培養(yǎng)前不經(jīng)過酶液處理,細(xì)胞損傷較小。但由于培養(yǎng)過程中細(xì)胞移動受到較大限制,完成原代培養(yǎng)所需的時間較長。
   細(xì)胞培養(yǎng)的程序一般為:
  1.組織塊修整:將組織塊用平衡緩沖液反復(fù)沖洗,然后在滅菌的培養(yǎng)皿中剪碎至碎塊的直徑小于1mm。
  2.貼壁:將組織塊間隔(小塊之間的間隔為1cm)放在培養(yǎng)皿中,培養(yǎng)基需要浸沒組織塊底部但不能使組織塊浮起。
  3.培養(yǎng):通過生長繁殖,細(xì)胞可以從組織塊邊緣向四周游出,生長繁殖連成片,原組織塊可以*消失。
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