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小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞能更好地發(fā)揮作用

更新時(shí)間:2020-05-13點(diǎn)擊次數(shù):2050
  小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離方法有全骨髓法和密度梯度離心法,全骨髓法即根據(jù)干細(xì)胞貼壁特性,定期換液除去不貼壁細(xì)胞,從而達(dá)到純化MSC的目的。密度梯度離心法即根據(jù)骨髓中細(xì)胞成分比重的不同,提取單核細(xì)胞進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。
  分離培養(yǎng)結(jié)果的差異可能是由于各個(gè)研究小組標(biāo)本來源、采用的分離方法不同從而所獲得的細(xì)胞不同,或者用來檢測(cè)的細(xì)胞代數(shù)不同,或者培養(yǎng)過程中用的胎牛血清不同,導(dǎo)致MSCs獲得或失去這些表面標(biāo)記物的表達(dá)。
  小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的培養(yǎng)一定要用塑料培養(yǎng)瓶,不能用玻璃的。因?yàn)橄箝g質(zhì)干這類的基質(zhì)細(xì)胞不易貼玻璃,而且現(xiàn)在買的培養(yǎng)瓶都涂有一層促細(xì)胞貼壁的物質(zhì),而且隨著細(xì)胞的擴(kuò)增,端粒的長(zhǎng)度不變,單個(gè)MAPC來源的細(xì)胞群不僅能在體外向3個(gè)胚層的細(xì)胞分化,而且能在體內(nèi)能夠向各種組織細(xì)胞分化,相比較而言,形態(tài)與MSC相似的體外培養(yǎng)的皮膚成纖維細(xì)胞則不具有類似的分化潛能。
  原代分離的間充質(zhì)干細(xì)胞在接種后培養(yǎng)24小時(shí),細(xì)胞開始貼壁,胞體呈圓形或多邊形,培養(yǎng)第3-5天,細(xì)胞開始較緊密貼附壁上并開始有細(xì)胞呈梭形,并不斷長(zhǎng)大、變長(zhǎng),但未觀察到細(xì)胞分裂,隨著細(xì)胞數(shù)的增加,細(xì)胞的生長(zhǎng)速度變快,逐漸成漩渦狀排列,培養(yǎng)第12天貼壁細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶底的80%,并融合成片。采用貼壁培養(yǎng)法可獲得足夠數(shù)量、生長(zhǎng)狀態(tài)良好、增殖能力強(qiáng)的間充質(zhì)干細(xì)胞,隨傳代數(shù)增加,其純度增加,且該方法簡(jiǎn)單、實(shí)用。
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